Библиотека: "Физиология спермиев и оценка качества спермы (реферат)"

Перейти вниз

Библиотека: "Физиология спермиев и оценка качества спермы (реферат)"

Сообщение автор Njusja в Чт Июл 03, 2014 7:26 pm

1.   Состав спермы
Сперма состоит из спермиев, образующихся в семенниках, и плазмы спермы — смеси секретов (выделений) придаточных половых желез (ампул спермиопроводов, пузырьковидных, предстательной, куперовых). В состав плазмы входит также в небольшом количестве и секрет эпителия канала придатка семенников. Соотношения между объемом спермиев и объемом плаз мы различны у животных разных видов. Жеребцы и хряки выделяют много секретов придаточных половых же лез, спермин у них составляют лишь 2—5 % объема эякулята; у баранов спермин составляют 25—50 %, у бы ков — 12—20 % объема эякулята.
Плазма спермы содержит белки, липиды, сахар (фруктозу), лимонную кислоту, соли и другие вещества, влияющие на жизнедеятельность спермиев. Составее у животных разных видов различен. В сперме баранов и быков, например, содержится много фруктозы, выделяющейся с секретами пузырьковидных желез, а в сперме жеребцов и хряков находят лишь следы фруктозы.
 
2.   Строение спермиев
Спермий — высокоспециализированная клетка; различают головку, шейку (соединительную часть), тело и хвост (жгутик) спермия . Длина спермиев животных равна 0,06—0,07 мм, или 60— 70 мкм (микрометров). Головка спермия занимает при мерно */э его длины, овальной формы, несколько усеченной со стороны шейки. В головке имеется ядро, где сосредоточена наследственная информация, тогда как шейка, тело и хвост — двигательный аппарат половой клетки. Головка имеет вид пластин, несколько изогну той на переднем конце. Из-за этого изгиба с одной стороны она кажется углубленной. Поверхность головки по крыта очень тонкой оболочкой (мембраной), непрерывно переходящей на шейку, тело и хвост спермия. Под мембраной находится акросома в виде чехлика, покрывающего две трети головки — ядра спермия. Акросома вырабатывает фермент — гиалуронидазу, растворяющую вязкое вещество, связывающее клетки лучистого венца яйца. Акросома — очень чувствительная часть спермия: при хранении спермы белок ее легко набухает, акросома отпадает от спермия, а последний теряет оплодотворяющую способность.
Короткой и тонкой шейкой головка прикреплена к телу спермия, длина которого вдвое больше, чем головка. Шейка очень хрупкая и при оплодотворении, когда спермий проникает в яйцо, ломается; в яйце остается лишь содержащая ядро головка. Основу тела, шейки и хвоста составляет осевая нить, состоящая из фибрилл, на всем протяжении (за исключением кончика хвоста) обвитых тройной спиральной нитью. Кончик хвоста состоит из не скольких фибрилл, не покрытых спиральными нитями; он лишен оболочки, покрывающей все остальные части спермия. При большом увеличении он похож на кисточку. Спиральные нити состоят из цепей овальных пузырь ков — митохондрий, в которых образуется энергия, необходимая для движения хвоста спермия. В середине осе вой нити имеются две центральные фибриллы; вокруг них расположены два кольца боковых фибрилл: кольцо из девяти «тонких» и кольцо из девяти «грубых» фибрилл .
 
3.   Химический состав спермиев
Спермин содержат около 25 % сухого вещества и 75 % воды. Из сухого вещества 85 % приходится на белки, 13,2 % — на липиды и 1,8 % —на минеральные вещества. В спермиях имеется также значительное количество фосфора, в головке много дезоксирибонуклеопротеида, а в хвосте спермия присутствуют разнообразные ферменты, активно участвующие в окислительных процессах спермия.
Оболочка, одевающая спермий, имеет белковое происхождение и содержит большое количество цистина. При длительном хранении спермы она отстает от спермия и становится видимой в виде пузыря на головке и лоскутков на хвосте.
 
4.   Механизм движения спермиев
Нормальные спермин имеют способность поступательно и прямолинейно двигаться в жидкой среде. Центром движения их являются тело и шейка. Головка не может самостоятельно двигаться, но спермин без головки могут сохранить способность к движению.
Движение спермия осуществляется благодаря тому, что хвостовая нить изгибается в правую и левую стороны в плоскости головки спермия. При этом попеременно пять фибрилл изгибаются в одну сторону и четыре — в другую. Кроме того, спермий вращается вокруг про дольной оси, так как головка его имеет небольшую вогнутость с одной стороны. В результате этого вращения удары хвоста, хотя и происходят все время в плоскости головки, направлены во все стороны. Такое винтообразное движение ведет к гому, что весь спермий движется прямолинейно и поступательно.

 
Если в связи с какими-либо неблагоприятными условиями происходит набухание чехлика и потеря ложкообразной формы головки, то спермий не может быстро вращаться вокруг своей оси и движется не прямолинейно, а по кругу, так как удары хвоста в ту и другую сторону неодинаково сильны. Такое движение называется манежным.
Движение может быть также колебательным, когда удары хвоста слабы и медленны. Спермий при этом не может двигаться вперед, а, вращаясь на месте, лишь изгибается вправо и влево. Та кое движение бывает при нарушении   центра  движения. Колебательное движение может быть и у нормального спермия при низкой температуре или слабокислой реакции среды. В таких случаях замедлено образование энергии, и при подогревании или подщелачивании среды спермий восстанавливают прямолинейное поступательное движение.
Все спермин имеют отрицательный электрический за ряд. Это свойство имеет большое значение: одинаково заряженные спермий отталкиваются друг от друга, и в густой сперме не происходит столкновения и слипания их. В густом эякуляте спермий располагаются рядами параллельно. Хвосты их сокращаются ритмично; такое одновременное направленное в одну сторону движение создает в плазме сильное вихревое движение, уносящее ряды спермиев. В эякулятах барана и быка с большой концентрацией спермиев вихревое движение их можно наблюдать в пробирке без микроскопа.
Но иногда в сперме можно наблюдать склеивание — агглютинацию спермиев
 
Это происходит в тех случаях, когда электрический заряд у них недостаточен, при встрече они не в состоянии отталкиваться и прилипают друг к другу головками и даже остальными своими частями. Состояние агглютинации возникает от разных причин. Так, нейтрализация отрицательного заряда спермиев происходит при увеличении кислотности спермы и наличии в ней ионов некоторых металлов. Склеивание может быть также при наличии агглютининов — особых веществ, появляющихся при иммунизации организма чужеродными белками.
Агглютинация в сперме обычно бывает временным явлением: когда спермин погибают, они расходятся. Это происходит не от увеличения электрического заряда, а от потери способности склеиваться вследствие изменения структуры оболочки.
Ориентированность движения спермиев. В медленно текущей капле спермы все спермин движутся в одном направлении: против тока жидкости. Это свойство их называется реотаксисом; оно важно для оплодотворения — в яйцепроводе спермин движутся на встречу яйцеклетке против тока жидкости. Быстрое течение спермин преодолеть не могут.
Мертвые спермин неподвижны, с вытянутыми хвоста ми, расположены беспорядочно и перемещаются вместе с током жидкости. Такое состояние их обозначается словом некроспермия — мертвая сперма .
 
5.   Влияние на спермиев внешних факторов
 Действие света. Прямые солнечные лучи возбуждают движение спермиев, но быстро убивают их. Рассеянный свет не вреден.
Это необходимо учитывать при работе и избегать прямого солнечного света; окна лаборатории следует завешивать марлей, при осеменении самок на открытом воздухе закрывать марлей баночки, ампулы со спермой и приборы для ее введения.

Действие температуры. Жизнеспособность спермиев вне организма зависит от температуры жидкости, в которой они находятся. Хорошую подвижность они имеют при температуре, близкой к температуре тела животных (37—39°С). Под воздействием более высокой температуры спермин погибают. При понижении температуры движение их замедляется, а при 15 °С и ниже из поступательного переходит в колебательное. При темпе ратуре, близкой к 0°С, спермин перестают двигаться и переходят в состояние покоя. Такое состояние называгот анабиозом. Если затем сперму подогреть до 37—39 °С, жизнедеятельность спермиев восстановится. Это  про исходит лишь в случае постепенного охлаждения спермы. При быстром охлаждении до температуры ниже 18— 20 °С (например, когда только что полученную от производителя сперму переливают в холодную мензурку или банку) в спермиях могут произойти необратимые изменения, называемые температурным шоком или холодовым ударом.
После температурного шока спермин при подогре вании снова могут двигаться, но их устойчивость и об мен веществ ослабевают, а оплодотворяющая способ ность резко снижается. Поэтому рекомендуется, что бы в лаборатории и манеже станций и пунктов искусст венного осеменения температура была не ниже 18 °С. Особенно чувствительна к быстрому охлаждению спер ма, только что выделенная производителем. После того как сперма постоит при комнатной температуре 1—2 ч, чувствительность спермиев к быстрому охлаждению не сколько снижается.
Осмотическое давление.  Вода действует на спермиев губительно. Под воздействием ее у многих из них закручиваются хвосты, набухают головки, спермин начинают кружиться (манежное движение) и довольно быстро погибают. Если в 100 мл воды растворить 2—3 г поваренной соли и этим раствором разбавить сперму, то спермин погибнут. Если же сперму разбавить 1 %-ным раствором соли, то спермин некоторое время сохраняют жизнеспособность. Следовательно, спермин могут жить в жидких средах при определенном содержании в них< растворенных веществ. Такие среды названы изотоническими,в них растворенные соли и другие вещества по осмотическому давлению соответствуют содержанию веществ внутри спермиев. Если в жидкости, окружающей спермиев, растворено больше веществ, чем требуется для создания изотонии, и осмотическое давление в ней больше, такая среда называется гипертонической, если меньше — гипотонической.
В таких средах спермин гибнут. Даже при небольшом несоответствии осмотического давления их пережи .ваемость значительно понижается.
В гипертонических растворах спермин погибают вследствие набухания от проникающей в них воды, в гипотонических, наоборот, происходит обезвоживание цитоплазмы вследствие выхода воды в среду, окружающую спермиев.
Кислотность среды. Все клеточные процессы в сперме происходят нормально только при определенных концентрациях водородных ионов (рН) среды. Свежеполученная сперма быка и барана имеет нейтральную (рН 7,0) или слабокислую (рН 6,7—6,9) реакцию, сперма жеребца и хряка — слабощелочную (рН 7,2—7,6) Щелочная реакция в сперме хряка и жеребца обусловле­на большим количеством находящихся в ней щелочных секретов придаточных половых желез, а в сперме жвачных, содержащих незначительное количество этих секретов, реакция среды, как правило, бывает слабокислой, так же как и в придатке семенника.
Небольшое увеличение кислотности замедляет движение спермиев, но они остаются живыми. Избыточная кислотность прекращает движение спермиев и убивает их. Щелочная реакция спермы хряка и жеребца способствует активной подвижности спермиев даже при температуре 10—15 °С, но при этом быстро расходуются энергетические ресурсы спермы. Чрезмерная щелочность, достигаемая, например, добавлением соды, сначала вызывает усиленное движение спермиев, но затем тоже убивает их.
Действие солей-электролитов. Большое влияние на жизнедеятельность спермиев оказывают растворы солей-электролитов, т. е. растворы, проводящие .электрический ток. Количество электролитов в сперме разных животных различно. Их много в сперме жеребцов и хряков, значительно меньше у быков и совсем не много у баранов.
Сперма быка и барана богата калием, поступающим главным образом с жидкостью придатка семенника. В сперме барана калия содержится 1400 мг%, быка — 984 мг%, тогда как в сперме хряка его — 243 мг%, а же ребца— только 62 мг%. Наоборот, в сперме жеребца и хряка много хлористых солей натрия: у жеребца содержится 476 мг% хлоридов, а у барана их всего 47мг%.
В придатке семенника электролитов очень мало, так как стенки канала придатка обладают способностью поглощать их. Содержание электролитов в среде, окружаю щей спермиев, повышается при эякуляции. Соли проникают внутрь спермиев медленнее, чем неэлектролиты (глюкоза, органические кислоты), однако резкое изменение электролитного состава среды, происходящее во время эякуляции, производит ряд физико-химических изменений в спермиях: вызывает энергичное движение, сдвиги в осмотическом давлении и значительно сокращает срок их жизни. Чем больше разбавлена сперма при эякуляции, тем быстрее погибают спермин. Сперма быка и барана, содержащая 1—4 млрд спермиев в 1 мл, может жить при температуре, близкой к 0°С, вне организма 3—7 и более суток, тогда как сперма жеребца и хряка, сильно разбавленная секретами придаточных желез и со держащая 0,1—0,3 млрд спермиев в 1 мл, обычно живет менее суток.
В отдельных фракциях спермы хряка и жеребца, где масса спермиев из придатка семенника смешана с незначительным количеством секретов придаточных половых желез, выживаемость спермиев бывает наибольшей. На оборот, во фракциях с малой концентрацией спермиев и большим разбавлением секретами желез выживаемость наименьшая.
Наличие в плазме солей слабых, кислот (карбонатов, цитратов, лактатов и фосфатов) определяет важное свой ство спермы — буферность — способность плазмы в неко торой степени сохранять свою реакцию. При действии более сильной кислоты металлы перечисленных кислот нейтрализуют ее, освобождаются более слабые кислоты, дающие во много раз меньше водородных ионов, чем сильные. В результате соли слабых кислот предотвраща ют возникновение значительной кислотности плазмы. Кроме того, при появлении в сперме щелочных веществ слабые кислоты могут нейтрализовать эти щелочи.
Белки спермы увеличивают ее буферность, так как они способны связывать кислоты и щелочные вещества. Сильным буфером являются соли лимонной кислоты (цитраты). Наибольшей буферностью обладает сперма быка и барана. Буферность играет большую роль в обеспечении жизнедеятельности спермиев, предохраняя их от повреждений, связанных с резким изменением среды.
Действие сахаров. В противоположность со левым растворам на жизнеспособность спермиев благо приятно действуют растворы различных Сахаров, особенно фруктозы. Добавление сахарных растворов (фруктозы, глюкозы, сахарозы, лактозы и др.) в определенных концентрациях устраняет возбуждающее действие хлористых солей на сиермиев жеребца и хряка.
Действие медикаментов. Очень многие дезинфицирующие средства и медикаменты весьма вредны для спермиев: йод, креолин, формалин, скипидар и другие убивают спермиев. Ядовиты также различные окислы металлов: ртути, свинца, железа и др. Поэтому недопустимо использование посуды из-под какого-либо плохо отмывающегося и пахучего вещества, например тикреолина. Некоторые антибиотики, сульфаниламидные и нитро-фурановые препараты в определенных концентрациях не вредны для спермиев. Их применяют для предупреждения развития микроорганизмов в сперме.
 
 
6.   Источники энергии для движения спермиев
В полученном от производителя эякуляте у спермиев имеется большая потребность в энергии, так как они подвижны. Деятельной частью спермия является тело и хвост, тогда как в головке жизненные процессы незначительны. Лишь в акросоме наблюдается слабое образование фермента гиалуронидазы, которая будет необходима при процессе оплодотворения. В теле и хвосте спермия образуются ве­щества и энергия, необходимые для движения спермиев. Основными процессами, при которых спермии получают энергию, являются гликолиз или фруктолиз и дыхание. Эти процессы происходят при постоянном распаде и восстановлении аденозинтрифосфата.

Д ы х а н и е — окислительный обмен, в процессе  спермии могут окислять жиры, углеводы и белки, но преимущественно окисляют простые сахара — фруктозу и глюкозу, а также продукты распада Сахаров, при гликолизе — молочную кислоту. Прибавление раствора глюкозы или фруктозы к сперме увеличивает запас энергетических веществ и в то же время предохраняет спермиев   от расходования других веществ, входящих в структуру  половых клеток. Если спермии быка или барана вовремя хранения при температуре 20°С израсходуют все сахара, имеющиеся в плазме, окислению подвергаются липиды: лецитин и его производные. В сперме жеребца и хряка в связи с очень низкой концентрацией сахара дыхание происходит за счет липидов, а в сперме жеребца имеется и некоторый расход белков.
Липиды являются составной частью спермиев, и рас ход их нежелателен. В разбавители спермы (синтетические среды) вводят лецитин для сохранения цитоплазмы спермиев или яичный желток, содержащий большой про цент лецитина, и цитрат или фосфат натрия. Цитрат и фосфат натрия нейтрализуют кислотность, образующуюся от добавления желтка, увеличивают буферную систему спермы. В таких искусственных средах спермии сохраняются значительно лучше, чем в естественной плазме. К тому же желток, вводимый в состав разбавителей, предотвращает температурный шок, наступающий в случае резкого охлаждения спермы. При окислении Сахаров и липидов образуются двуокись углерода (СО2), вода и выделяется значительное количество энергии, исполь зуемой спермиями при движении.
В процессе дыхания участвует ряд ферментов. ИнтенсивАость дыхания зависит от температуры: при понижении температуры до 10 °С дыхание ослабляется вдвое по сравнению с дыханием при температуре 37 СС. Чем больше концентрация живых спермиев, тем интенсивнее про является процесс дыхания. Величина дыхания — один из показателей качества спермы.
Г л и к о л и з   (фруктолиз)—получение  энергии для движения и других жизненных процессов спермиев путем расщепления сахара без кислорода. При гликолизе из того же количества сахара получается в 20 раз меньше энергии, чем при дыхании. Следовательно, при отсутствии кислорода спермии затрачивают значительно больше питательных веществ. Гликолизу подвергаются только некоторые сахара (фруктоза, лактоза, глюкоза)
Спермии в придатке семенника почти неподвижны, так как жидкость придатка не содержит сахара. Сахара продуцируются пузырьковидными железами, и после эякуляции сахар быстро проходит через оболочку спермиев, обеспечивая процессы образования энергии. В сперме быка и барана процессы гликолиза значительны, а у жеребца и хряка они очень невелики; так, всперм этих животных сахара почти нет. Спермии жеребца и хряка получают энергию в результате дыхания, но при разбавлении средой с глюкозой и фруктозой спермии этих животных могут долго сохранять подвижность в анаэробных условиях, что свидетельствует о процессе гликолиза. Выживаемость спермиев в этих случаях увеличивается в несколько раз. При гликолизе в сперме образуется молочная кислота, которую спермии выделяют в окружающую среду. В сперме быков и баранов молоч ной кислоты накапливается так много, что, несмотря на наличие буферной способности плазмы спермы, реакция ее становится более кислой, движение спермиев все более и более замедляется и они переходят в состояние анабиоза, в котором могут оставаться довольно длительное время.
При небольшой кислотности (рН 6,0) наступает первая фаза анабиоза: спермии не движутся при комнатной температуре, но при подогревании до 37—40 °С они начинают перемещаться. При большей кислотности (рН 4,5— 5,0) наступает вторая фаза анабиоза, и чтобы возобновить движение спермиев, сперму, кроме нагревания, необходимо еще разбавить нейтрализующим кислоту разбавителем, например раствором лимоннокислого натрия. Лишь при этом условии спермин начинают двигаться.
В состоянии анабиоза процессы дыхания и гликолиза значительно затормаживаются, что благоприятствует сохранению спермиев. Но при очень большом накоплении молочной кислоты она становится токсичной для спермиев, и они погибают.
При понижении температуры, так же как и при подкислении, жизненные процессы замедляются, движение спермиев останавливается, дыхание и гликолиз делаются незначительными, и создаются условия, препятствующие развитию микроорганизмов. В покоящемся состоянии спермин могут сохраняться длительное время.
Хранение спермиев в анабиотическом состоянии широко применяют в практике искусственного осеменения. Для хранения спермы быков и жеребцов в течение многих месяцев и даже нескольких лет разработаны способы замораживания ее в жидком азоте (при температуре минус 196 °С),'при этом обмен у спермиев практически прекращается, а оплодотворяющая способность их сохраняется.

_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
Если ты такой умный, то почему тогда такой бедный???? / "Правда всегда одна." (с) Царь Соломон.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку]

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] - Мои собаки, а так же Доги в Латвии.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] -  Подготовка и хендлинг (показ) ВАШЕЙ СОБАКИ в странах Европы и не только.
avatar
Njusja
Дожик

Сообщения : 1553
Дата регистрации : 2012-02-12
Возраст : 80
Откуда : Riga, Latvija

http://www.olvig.weebly.com

Вернуться к началу Перейти вниз

Re: Библиотека: "Физиология спермиев и оценка качества спермы (реферат)"

Сообщение автор Njusja в Чт Июл 03, 2014 7:28 pm

7.   Методы определения качества и оплодотворяющей способности спермы производителе
Сперму от производителей получают в искусственную вагину и оценивают по активности движения спермиев, насыщенности (концентрации) в 1 мл спермы и продолжительности выживания. Кроме того, учитывают объем эякулята, общее число спермиев в нем, цвет и запах спермы. В некоторых случаях определяют также морфологический состав спермиев — процент нормальных и ненормальных по форме спермиев.
Условия работы со спермой. Свежеполученная сперма при быстром охлаждении подвержена температурному шоку, поэтому работу с ней проводят в помещении лаборатории (температура 18—23°С). Все пред меты в лаборатории, с которыми может соприкасаться сперма (мензурки, покровные и предметные стекла, сте лянные палочки и пр.), должны быть чисто вымыты, про стерилизованы, сухие или промыты физиологическим раствором.
Подвижность (активность) спермиев исследуют под микроскопом при увеличении в 200—300 раз (объектив 40, окуляр 7; объектив 20, окуляр 10 или 15). Микроскоп ставят так, чтобы прямые солнечные лучи не по падали в зеркало; при слишком сильном освещении спер мии в поле зрения плохо видны. Поле зрения микроскопа должно быть светло-серым.
Сперму необходимо оценивать при температуре 38 40 °С в ящике-термостате или на обогревательном столике.
 
Термостат с микроскопом   для просмотра спермы 
 
Подогревать предметное стекло с каплей на огне не следует, так как спермин при этом погибнут. Температура в термостате измеряется термометром и регулируется подбором электроламп или терморегулятором.
 
8.   Влияние осмотического давления на спермиев
На предметное стекло палочкой наносят каплю спермы, накрывают покровным стеклом и под микроскопом определяют подвижность спермиев. Таким же путем исследуют сперму в следующих вариантах ее разбавления: 1) к капле спермы добавляют 2—3 капли 1 о/о­ного раствора хлористого натрия; 2) к капле спермы добавляют 2—3 капли 3 %-ного раствора хлористого натрия — наблюдают гибель спермиев; 3) к капле спермы добавляют 2—3 капли разбавителя спермы; 4) к капле спермы добавляют 2—3 капли дистиллированной или водопроводной воды — наблюдают закручивание хвостов, манежное движение и гибель спермиев; 5) к капле спермы добавляют 2—3 капли 0,5 %-ного раствора хлористого натрия — наблюдают манежное движение и закручивание хвостов у части спермиев.

Все указанные микроскопические исследования про водят в теплой комнате, желательно пользоваться термостатом или обогревательным столиком для микроскопа.
 
9.   Влияние кислотности среды на спермиев.
Материалы и оборудование: микроскопы, термостаты, сперма животных, предметные и покровные стекла, 1 %-ный раствор двууглекислой содьь 0,5 %-ные растворы гидроокиси натра и соляной кислоты.
На предметное стекло наносят палочкой две капли спермы. К одной из них добавляют каплю 1 %-ного раствора двууглекислой соды. Покрывают кап ли покровными стеклами. Под микроскопом сравнивают активность движения спермиев в каплях без раствора и с раствором соды. К новой капле спермы добавляют каплю0,5 %-ного раствора гидроокиси натра. Под микро скопом наблюдают за спермиями. К другой капле спермы добавляют каплю 0,5 %-ного раствора соляной кис лоты — наблюдают за спермиями.
 
10.   Действие медикаментов и дезсредств на спермиев.
Материалы и оборудование: микроскопы, сперма животных, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки и пипетки, спиртовой раствор йода, 2 %-ный раствор формалина, 2 %-ный раствор лизола, 70 %-ный спирт-ректификат.
На предметное стекло наносят каплю спермы и определяют з ней под микроскопом подвиж ность спермиев. На другом предметном стекле к капле спермы добавляют каплю какого-либо дезсредства. Кап ли перемешивают, покрывают покровным стеклом и при помощи микроскопа устанавливают, через сколько минут прекратилось движение спермиев. Так проверяют дейст вие всех перечисленных выше средств, за исключением йода.
Влияние йода на спермиев изучают следующим об разом: на предметное стекло вокруг капли спермы наносят несколько мелких капель настойки йода так, чтобы затем их соединить сплошным кольцом. Не покрывая каплю спермы покровным стеклом, предметное стекло помещают на столик микроскопа. Подвижность спермиев определяют каждую минуту до прекращения движения.
Пары йода, улетучиваясь, губительно действуют на спермиев. Подвижность спермиев прекращается, а сперма желтеет от проникающих в нее паров йода. При смешивании капель спермы и настойки йода спермин гибнут моментально.
 
11.   Оценка спермы по внешним признакам.
Спермоприемники для спермы баранов и быков обычно градуированы, объем полученной спер мы устанавливают в них без переливания в другую по суду. Если же спермоприемник не градуирован, объем полученной спермы измеряют при помощи пипетки или градуированной мензурки. Сперму, полученную от жеребца, переливают из резинового спермоприемника в градуированную мензурку, процеживая через стерильную марлю. Иногда на марле остается густой, тягучий секрет придаточных половых желез. Его учитывают отдельно. Сперму хряка, если ее получали в спермоприемник без фильтра, при переливании в мензурку тоже фильтруют через марлю.
Нормальная сперма быка "белого цвета с желтоватым оттенком. Сперма барана еще более желтая, чем у быка. Сперма жеребца и хряка белая с сероватым оттенком. Нормальная сперма производителей не имеет запаха, кроме спермы барана, которая специфически пахнет жиропотом. Запах мочи в сперме хряка свидетельствует о ее загрязнении и немытом препуции производителя.
Розовый и красный цвет спермы означает, что в нее попала кровь. Зеленоватый цвет с гнилостным запахом и беловатыми хлопьями указывает на наличие гноя, что бывает при гнойном воспалении придаточных половых желез и реже — при заболевании семенников и придатков. Такую сперму бракуют, а самого производителя лечат и не используют до окончательного выздоровления.
 
12.   Оценка сперму по подвижности и концентрации спермиев.
Активность движения (подвижность) спермиев является важным показателем в первоначальной оценке полученной спермы. Сперма, в которой отсутствуют спермин с активным поступательным движением, не пригодна для оплодотворения.
Материалы и оборудование: свежеполученная сперма, микроско­пы, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки, марлевые салфетки, термостаты.
В каплю спермы наносят на предметное стеклонакрывают покровным стеклом и исследуют при температуре 38—40°С. В поле зрения микроскопа на глаз определяют процент спермиев с активным поступательным движением. Например, в поле зрения микроскопа спермиев с поступательным движением около 80 %. Следовательно, сперму можно оценить баллом 8. Когда все или почти все спермин двигаются поступательно, ста вят высший балл 10. Спермин с манежным и колеба тельным движением не входят в оценку. При наличии спермиев только с колебательным движением сперму оценивают буквой К, при наличии только манежного движения — буквой М. Неподвижность всех спермиев обозначают буквой Н (некроспермия).
В свежеполученной хорошей сперме барана и быка 80—90 %. а в сперме жеребца и хряка 60—80 % спер миев двигается поступательно.
Необходимо различать манежное движение от поступательного прямолинейного движения. Для этого надо проследить путь движения нескольких спермиев в поле зрения микроскопа. Вместе с тем не следует манежное движение путать с вихревым, которое бывает в свежеполученной густой сперме барана и быка с очень активной подвижностью спермиез. В густой сперме спермин рас полагаются параллельно, и хвосты их движутся ритмично, в такт. Масса одновременных ударов хвостов создает вихреобразное движение в жидкости . В густой хорошей сперме барана вихреобразные движения видны простым глазом: это явление указывает на хорошее качество спермы.
13.   Определение концентрации спермиев
 Насыщенность спермиев в 1 мл спермы и общее число их в эякуляте характеризуют функцию основных половых желез — семенников. К тому же спермин при большой концентрации их в сперме обычно жизнеспособнее, чем при малой концентрации.
             Одновременно с оценкой под микроскопом подвижности спермиев глазомерно определяют так же густоту спермы — степень насыщенности ее спермия ми. При этом сперма может быть густая — все поле зрения заполнено спермиями, обозначают буквой Г; средняя — между спермиями промежутки примерно равны длине спермиев, обозначают буквой С; редкая — между спермиями в поле зрения большие промежутки, обозначают  буквой  Р
Глазомерная оценка концентрации спермиев хотя и применяется на некоторых племпредприятиях, но она все же субъективна и недостаточно точна. Кроме того, понятие о густоте спермы для каждого вида животных различно. Поэтому следует применять другие, более точные методы определения концентрации спермиев.
 
14.   Подсчет спермиев в счетной камере.
Точное определение концентрации спермиев производят в счетных камерах Тома, Горяева, Бюркера и других, применяемых также для подсчета форменных элементов крови.
На верхний конец смесителя надевают резиновую трубку. Набирают в него сперму барана или быка до отметки 0,5. Затем в тот же смеситель набирают 3 %-ный раствор хлористого натрия до отметки 101. В 3 %-ном растворе хлористого натрия спермин неподвижны, что облегчает подсчет их. Зажимают оба конца смесителя пальцами (большим и указательным) и встряхивают 1—2 мин. Когда сперма равномерно смешалась с раствором, из смесителя выпускают 2—3 капли, чтобы удалить из пипетки смесителя раствор, не смешанный со спермой. Следующую каплю наносят на сетку камеры под покровное стекло. Переносят камеру на предметный столик микроскопа и подсчитывают спермии при увеличении в 400 раз.
v Подсчет производят в пяти больших квадратах (в 80 маленьких квадратиках), расположенных по диагонали сетки. Считают только тех спермиев, головки которых лежат внутри квадратиков или размещены на верхней и левой линиях его

При подсчете число спермиев в каждом большом квадрате (16 маленьких) записывают отдельно. Подсчет удобно вести с помощью счетчика для лейкоцитов крови. При просмотре первого большого квадрата камеры, т. е. 16 маленьких квадратиков, нажимают пальцем на первый клавиш счетчика столько раз, сколько там спермиев. При подсчете спермиев во втором большом квадрате нажимают на второй клавиш, в третьем —• на третий клавиш и т. д. В верху каждого клавиша будет отражена сумма подсчитанных спермиев. По окончании подсчета суммируют число спермиев во всех пяти больших квадратах.
Например, в первом большом квадрате насчитано 45, во втором — 48, в третьем — 52, в четвертом — 56, в пя том — 53, а всего в пяти больших квадратах — 254 спер мия. Если сперму разбавляли в 200 раз в эритроцитном смесителе, то, разделив число 254 на 100, получаем, что в 1 мл спермы содержится 2,54 млрд спермиев. Если сперму набирали в смеситель до отметки 1,0, то полученную сумму делят на 200. Если разбавление призводи ли в лейкоцитном смесителе и сперму набирали до от метки 0,5, то сумму спермиев делят на 1000. Например, при подсчете спермиев хряка в сперме, разбавленной в 20 раз в лейкоцитном смесителе, в пяти больших квад­ратах оказалось 240 спермиев; это число делят на 1000 и получают концентрацию спермиев в 1 мл, равную 0,24 млрд.
Расчет основан на следующей формуле:
 
С= п D400 Р / N=240*20*400*10/80 =24000
 
где С — концентрация спермиев; п — число подсчитанных спермиев; D — степень разбавления спермы в смесителе; — число малых квадратов, в которых произве ден подсчет; Р — глубина камеры, равная 0,1 мм; 400 — число малых квадратов на площади в 1 мм2.
Для определения числа спермиев в 1 мл спермы по лученное число умножают на 1000 и получают 240 млн, или 0,24 млрд.
Для большей точности спермии в камере подсчитывают 2 раза.
После работы камеры предметные и покровные стекла тщательно моют сначала простой, а затем дистиллированной водой и протирают чистой сухой мягкой салфеткой. Смесители промывают водой, спиртом, а затем эфиром и высушивают, продувая воздух при помощи резиновой груши или шаров Ричардсона.
 
 
 
15.   Определение концентрации спермиев в сперме быка при помощи фотоэлектроколориметра ФЭК-М
            Принцип работы этого прибора основан на том, что через кювету со спермой пропускают пучок световых лучей определенной силы, который затем по падает на селеновый фотоэлемент, соединенный с гальванометром. Через гальванометр проходит электрический ток, величина которого обратно пропорциональна мутности (оптической плотности) спермы, т. е. концентрации спермиев.
Для проведения исследования приготовляют 3,5 % ный раствор лимоннокислого натрия на дистиллирован ной воде, фильтруют его через бумажный фильтр и разливают в хорошо вымытые и просушенные флаконы из-под пенициллина по 9,9 мл в каждый флакон. Микро пипеткой набирают точно 0,1 мл исследуемой спермы и смешивают ее с раствором лимоннокислого натрия в одном из флаконов, разбавляя таким образом сперму в 100 раз. Пипетку несколько раз промывают раствором-из этого флакона, чтобы в ней не осталось спермиев.
Разбавленную сперму выливают в кювету фотоэлектроколориметра с рабочей длиной 10 мм, перемешивают в ней сперму еще раз стеклянной палочкой и ставят в правое гнездо прибора на расстоянии, наиболее уда ленном от фотоэлемента. В левое гнездо прибора помещают такую же кювету, наполненную раствором лимоннокислого натрия без добавки спермы. Затем шкалу отсчета оптической плотности левого барабана устанавливают на ноль и, вращая фотометрические клинья, переводят на ноль стрелку гальванометра вначале грубой настройкой (регулятором № 1), а затем точной настрой кой (регулятором №2).
После этого вынимают кювету со спермой из правого гнезда и ставят вместо нее кювету с раствором лимонно кислого натрия. Стрелка гальванометра при этом отклоняется, и ее ставят на нуль, поворачивая левый барабан На красной шкале этого барабана читают показатель оптической плотности. Каждые 0,05 деления шкалы соответствуют концентрации спермиев, обозначенной на градуировочной кривой, которая выводится ежемесячно, обязательно отдельно для каждого прибора. Подробная методика пользования фотоэлектроколориметром излагается в руководстве, прилагаемом к прибору, и в инструкции по организации и технологии работы станций по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных.

_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
Если ты такой умный, то почему тогда такой бедный???? / "Правда всегда одна." (с) Царь Соломон.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку]

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] - Мои собаки, а так же Доги в Латвии.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] -  Подготовка и хендлинг (показ) ВАШЕЙ СОБАКИ в странах Европы и не только.
avatar
Njusja
Дожик

Сообщения : 1553
Дата регистрации : 2012-02-12
Возраст : 80
Откуда : Riga, Latvija

http://www.olvig.weebly.com

Вернуться к началу Перейти вниз

Вернуться к началу


 
Права доступа к этому форуму:
Вы не можете отвечать на сообщения