Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3

Перейти вниз

Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3

Сообщение автор Njusja в Чт Июл 03, 2014 6:42 pm

ВВЕДЕНИЕ
Осмотр сук и кобелей следует проводить за 3 недели перед вязкой. Кобель, от которого в пре­дыдущую вязку родились здоровые щенки, не нуждается в подтверждении фертильности. Од­нако если с момента последней фертильной вязки прошло более года или возраст произво­дителя превышает 7 лет, рекомендуется все же его обследовать. Клиническое обследование должно включать в себя оценку общего состоя­ния здоровья, анализ семенной жидкости, ос­мотр пениса и препуция и пальпацию простаты, семенников и придатков семенников. У сук оце­нивают общее состояние здоровья, убеждаются в том, что проведены вакцинации и дегельмин­тизация. Осмотр наружных половых органов включает инспекцию влагалища и преддверия влагалища на наличие стриктуры, стеноза или сохранения гимена. Для вычисления оптималь­ных сроков вязки проводят исследование ваги­нальных выделений и/или тест на концентрацию прогестерона.
ПСИХОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВЯЗКИ
Перед проведением искусственного осеменения –в случае вероятных проблем при вязке — как владелец животного, так и ветеринарный врач должны учесть психологические и физио­логические механизмы нормальной вязки. Тем более что психологию взаимоотношений во время вязки понимают далеко не все заводчики. Дня вязки суку доставляют к производителю, а не наоборот; соблюдение этого условия особенно важ­но в случае, если речь идет о первой вязке моло­дого кобеля. Желательно, чтобы пару молодому кобелю составляла опытная сука, и наоборот — партнеры для неопытной суки был выбран зрелый кобель.
Между кобелем и сукой складываются опре­деленные взаимоотношения, возникает симпа­тия или, наоборот, неприязнь, которая может принести к тому, что кто-то из партнеров отка­жется от коитуса. Социальный статус кобеля или суки и фактор доминирования также способны создавать проблемы. Молодой самец, занимаю­щий подчиненное положение, в обществе доми­нирующей суки испытывает робость, которая оборачивается трудностями при попытке совер­шить садку или интромиссию. Доминирующая сука даже в период эструса может подавлять та­кого партнера, вынуждая его отказаться от вяз­ки, зато охотно спарится с кобелем, занимаю­щим доминирующее положение. Поскольку су­ществуют проблемы, причины которых выходят за рамки физиологии, целесообразно рассмот­реть некоторые психологические факторы.
 
ПРОЯВЛЕНИЯ ПОЛОВОГО ПОВЕДЕНИЯ У СУК
Часто признаки приближения течки становят­ся заметны за несколько недель до наступления проэструса. Сука заигрывает или делает садку на других собак — как на кобелей, так и на сук. У нее снижается или, наоборот, повышается аппетит, она начинает чаще мочиться, прояв­ляет непослушание, хуже ведет себя во время дрессировки. Для опытного заводчика такое поведение является сигналом, что приближает­ся течка.
В период проэструса у суки повышается ин­терес к общению с другими собаками. Но на приближение кобеля она реагирует пассивно, может даже укусить и отогнать его, если он по­пытается ее обнюхать. В конце проэструса по­ведение меняется. Сука становится игривой, проявляет инициативу в общении с самцами, позволяет им обнюхивать себя. Начало эструса отмечается характерным поведением, например, сука стоит, помахивая хвостом, и отводит его в сторону. Некоторые суки при обнюхивании сам­цом приподнимают круп, демонстрируя вульву. Когда кобель кладет лапу на спину суки, она прогибается (лордоз) и может сама заигрывать с ним (толкать носом, класть лапу на спину, имитировать садку), если он по какой-то причи­не проявляет робость. Во время вязки сука сто­ит спокойно, широко расставив задние лапы, приподняв круп и отведя в сторону хвост.
 
ПРОЯВЛЕНИЯ ПОЛОВОГО ПОВЕДЕНИЯ У КОБЕЛЕЙ
Молодые кобели демонстрируют садку с самого раннего возраста (с 4-5 недель), это считается нормой, Такая активность важна для кобеля и яв­ляется тренировкой полового поведения. Кроме того, садка на других собак или неодушевленные предметы способствует половому созреванию. Однако подобное поведение необходимо реши­тельно пресекать, если оно направлено на людей, а особенно на детей.
Феромоны, содержащиеся в вагинальных вы­делениях и моче течкой суки, привлекают кобе­лей даже на значительном расстоянии и побуж­дают их следовать за ней. При совместном содер­жании кобель зачастую даже отказываться от пищи и воды, если у суки течка. На это время его лучше удалить. Некоторые кобели проявляют склонность к голосовому выражению возбужде­ния и воют без устали целыми днями. Другие пытаются убежать от хозяев, выбив с этой целью дверь или окно, сделав подкоп или перепрыгнув через изгородь; на пресечение таких попыток они нередко отвечают деструктивным поведением. У кобелей, страдающих заболеваниями предста­тельной железы (например, кистозной гиперпла­зией), наблюдаются кровянистые выделения из пениса, объясняющиеся разрывом из-за возбуж­дения, заполненных кровью кист.
Поведение кобеля и принимаемые им позы при встрече с течкой сукой обычно свидетель­ствуют об игривом настроении с примесью опа­сения, последнее напрямую зависит от социаль­ного статуса кобеля. Он приближается к суке, помахивая хвостом, насторожив уши, избегает смотреть на нее пристально. Если она позволя­ет ему приблизиться, кобель вылизывает ей уши и морду, обнюхивает ее, кладет ей на спину лапу или голову. Если сука не проявляет дружелюбия, кобель может начать игру, дабы усыпить ее бди­тельность, он припадает к земле или предла­гает суке догнать его.
 
НОРМАЛЬНАЯ ВЯЗКАСостоит из 6 этапов:1. Садка.
2. Кобель совершает активные движения и интромиссию — начальная эрекция.
3. Эрекция — набухание головки полового чле­на — отделение первой фракции эякулята (прозрачный секрет предстательной железы).
4. Эякуляция — отделение второй фракции (белая, содержащая сперму жидкость) — ро­тация.
5. Замок — продвижение спермы — отделение третьей фракции (прозрачный секрет пред­стательной железы).
6. Разрыв замка и окончание вязки.Садка
Если сука подпускает кобеля (фиг. 1). он об­хватывает ее круп передними лапами и соверша­ет характерные движения. Неопытный кобель обычно контролирует свои движения, пытаясь сориентировать пенис и обнаружить вульву суки. Начальная эрекция обеспечивает интро­миссию с помощью кости полового члена. При контакте с вульвой движения кобеля активизи­руются.
 
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]
 
 
Рис 1Садка
 
 
 
ИнтромиссияПосле введения пениса в вульву движения кобеля становятся более активными и энергичными. Он переступает с ноги на ногу (приплясывает), слегка приподнявшись над сукой.Эрекция и набухание головки полового члена
За время этой стадии достигается полная эрек­ция. Происходит удлинение головки полового члена, луковица остается закрепленной на кос­ти пениса, тогда как pars longa glandisперемеща­ется вперед поверх кости полового члена. Луко­вица набухает, обеспечивая сцепление пениса с влагалищем суки (замок). Звуки, издаваемые течкой сукой, и ее запах стимулируют эрекцию, которая возникает благодаря импульсам, посту­пающим из возбуждающих (тазовых внутренно­стных) нервов, состоящих из парасимпатичес­ких волокон таза и крестцовых нервов. Нерные импульсы обеспечивают расширение наружных и внутренних срамных артерий, ведущих к пе­щеристым телам пениса; сокращение седалишноуретральных мышц предотвращает отток ве­нозной крови. Кровь задерживается в синусах пещеристой ткани луковицы, вызывая ее набухание. Сокращение седалишно-кавернозной и луковично-губчатой мыши, а также констрикиия вульвы во время замка поддерживают интенсив­ность эрекции. В ходе этой фазы выделяется первая фракция эякулята (1—2 мл прозрачного секрета простаты).

Эякуляция и ротацияЭякуляция
По достижении полной эрекции происходит отделение второй фракции, содержащей спер­матозоиды (1-2 мл). Этот процесс занимает 1-2 минуты. Эякуляция происходит в результате стимуляции нервных окончаний пениса. Спер­ма с секретом предстательной железы выбрасы­вается благодаря сокращениям мускулатуры, ок­ружающей уретру, в частности, булъбокавернозной и седалишнокавернозной мышц. Как правило, на этой стадии самец прекращает ак­тивные движения, что совпадает с началом эяку­ляции.
 
Ротация
Самец поднимает одну лапу и поворачивается вокруг своей оси, принимая положение «хвост к хвосту» (Рис.2), при этом головка пениса остается в первоначальном положении. Элас­тичный участок пениса, расположенный поза­ди головки, обеспечивает разворот на 180 гра­дусов. Разворот не причиняет животному дис­комфорта, поскольку кость полового члена препятствует обтурации уретры во время эрек­ции и разворота. Согласно существующему предположению ротация вызывает окклюзию главной вены пениса и тем самым предотвра­щает прекращение эрекции. Некоторые кобе­ли не совершают разворота, другие остаются в положении садки, что может причинять суке определенные неудобства, особенно если самец отличается крупными размерами; в таких слу­чаях его осторожно приподнимают, облегчая положение самки.
 
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]
 
Рис. 2 Ротация
Замок
Во время замка кобель обычно стоит спокойно в положении «хвост к хвосту» (Рис.3). На дан­ной стадии происходит эякуляция третьей фрак­ции семенной жидкости (5-20 мл секрета пред­стательной железы). Одновременно с движени­ями хвоста происходят ритмичные сокращения перинеальной мускулатуры.
 
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]
 
 
Рис. 3Замок
 
 
 
 
 
Замок продолжается от 10 до 45 минут, одна­ко автор статьи наблюдал замок, длившийся не менее часа. Насколько можно судить, продол­жительность замка не оказывает влияния на ре­зультаты вязки. Оплодотворение происходит и при отсутствии замка, после эякуляции второй фракции эякулята, содержащей сперматозоиды, т.е. после окончания самцом толчкообразных движений. Существует предположение, что от­сутствие замка сказывается на численности по­мета, однако, по наблюдениям автора, такое мнение ошибочно.
Во время вязки (садки, интромиссии и зам­ка) опытные суки стоят спокойно. В некоторых случаях сука может попытаться уйти, увлекая за собой кобеля. Обычно такое поведение не при­чиняет вреда животным, однако разумнее при­держивать суку за ошейник, предотвращая по­добную попытку.
Разъединение замка
Перед разъединением эрекция головки полово­го члена спадает, и партнеры расходятся. Обыч­но самец вылизывает пенис, который после это­го втягивается в препуций. Если между отвер­стием препуция и пенисом оказалась шерсть или туда попала кожа внешнего слоя препуция, вызывая болезненные ощущения, самцу оказы­вают помощь. Полная ретракция пениса достигается нажатием на препуций в 2-3 см поза­ди отверстия входа, вызывающим раскрытие отверстия.
 
После вязки сука обычно энергично вылизывает влагалище, удаляя вытекшую сперму. Неко­торые самки могут демонстрировать побужде­ние, прыгать и играть или кататься по земле. Ос­танавливать животное или не позволять ему мочиться нецелесообразно, поскольку во время замка большая часть эякулята уже попала в мат­ку и маточные трубы.

АНОМАЛЬНАЯ ВЯЗКАПроблемы, связанные с сукой
Несмотря на то, что сука подпускает кобеля и позволяет ему совершить салку, при некоррект­ном выборе сроков вязки могут наблюдаться трудности, обусловленные значительным оте­ком влагалища. Кобель не в состоянии внести пенис достаточно глубоко, в результате достичь замка не удается. Часто повторная попытка, предпринятая на следующий день, оказывается вполне успешной. Если животные молодые и неопытные, то кобелю следует оказать помощь, поддерживая его за круп, направляют пенис во влагалище.
Некоторые суки, обычно спокойные и мир­ные, могут паниковать во время интромиссии, проявлять агрессию по отношению к самцу и даже пытаться укусить владельца. В некоторых случаях целесообразно применение транквили­заторов или проведение искусственного осеме­нения, хотя в последнем случае следует прини­мать во внимание существующие в Kennel Club правила регистрации щенков, родившихся в ре­зультате искусственного осеменения.
Констрикция кольцевых мышц влагалища, вызванная ригидностью гимена или стриктурой, препятствует полной интромиссии. Сохранение гимена характерно для молодых самок; дефект устраняют, введя палец в перчатке во влагалище. В некоторых случаях может возникать необхо­димость в хирургическом удалении гимена, од­нако образование рубцовой ткани может спать источником проблем при родах. Искусственное осеменение является наилучшей альтернативой при стриктуре влагалища или сохранении гиме­на, если имеющийся просвет позволяет ввести соответствующие инструменты
Отек слизистой оболочки влагалища, наблю­даемый на стадии эструса, может приводить к ее чрезмерному набуханию и пролапсу. Гиперпла­зия слизистой препятствует совершению коитуса, а часто и введению инструментария искусственного осеменения. Для лечения назначают вяжущие препараты и дезинфицирующие растворы, при тяжелых поражениях рекомендуется хирургическое удаление гипертрофированой ткани. Неосложненная гиперплазия слизи­стой влагалища, как правило, регрессирует после окончания эструса, однако у таких животных наблюдается тенденция к рецидивам заболевания в следующую течку. По этой причине склонных к гиперплазии слизистой влагалища не используют в племенном разведении.

Проблемы, связанные с кобелём.Одной из наиболее распространенных проблем, вызывающих затруднения но время вязки, является неопытность самца. В подобных случаях кобель нередко пытается совершить интромиссию в области анального отверстия или ниже пульпы. Молодые кобели зачастую испытывают перевозбуждение, приводящее к преждевременной эрекции головки пениса, препятствующее интромиссии. На стадии начальной эрекции происходит -эякуляция секрета простаты. Эякуляция второй фракции происходит позднее. Необходимо временно разлучить самца с парт­нершей и дать ему успокоиться, а через 30 ми­нут предпринять вторую попытку. В случае не­удачи наилучшим выходом является искусственное осеменение.
В редких случаях молодые кобели неспокойны к совершению коитуса из-за фимоза, всо­ванного адгезией пениса и препуция или стрик­турой отверстия препуция. В обоих случат не­обходимо хирургическое вмешательство.|
Отсутствие либидо у самца может быть обус­ловлено целым рядом причин, к которым относится неприязнь к половому партнеру, ошибка в выборе сроков вязки, гипоплазия тестикулов, заболевания предстательной железы, мочевые конкременты (редко), баланопостит, эпидидимит, вертебральный артроз (часто встречается у собак таких пород, как датская гончая и пекинес), заболевания нижнего отдела позвоночни­ка (спондилез у боксеров) и задних конечностей (дисплазия тазобедренного сустава). Для выявления причины проводят клиническое исследование. Если либидо снижено из-за психологических проблем, замена партнерши может исправить ситуацию. При сохранении возбуждения самца спаривают с другой самкой собирают сперму для искусственного осеменения. В тех случаях, когда обнаружены заболевания предстательной железы, мочевые конкременты, эпидидимит и баланопостит, проводят соответствующее лечение. Если проблемы с либидо объясняются наследственными заболеваниями, необходимо обсудить с владельцем этическую сторону вопроса и объяснить, почему жи­вотных с генетическими дефектами не исполь­зуют в племенном разведении.
 
СБОР И ХРАНЕНИЕ СПЕРМЫСбор спермы
К условиям, обеспечивающим сбор спермы, отно­сятся: присутствие раздражителя — обычно сам­ки, находящейся в состоянии течки (предпочти­тельнее всего на

_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
Если ты такой умный, то почему тогда такой бедный???? / "Правда всегда одна." (с) Царь Соломон.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку]

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] - Мои собаки, а так же Доги в Латвии.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] -  Подготовка и хендлинг (показ) ВАШЕЙ СОБАКИ в странах Европы и не только.
avatar
Njusja
Дожик

Сообщения : 1553
Дата регистрации : 2012-02-12
Возраст : 80
Откуда : Riga, Latvija

http://www.olvig.weebly.com

Вернуться к началу Перейти вниз

Re: Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3

Сообщение автор Njusja в Чт Июл 03, 2014 6:44 pm

пике эструса, но если сука бу­дет вести себя спокойно, подойдет любая стадия); отдельное помещение и выход на пло­щадку, на случай, если самец предпочитает пред­варительно поиграть с самкой; минимальное ко­личество людей. Перечисленные условия благо­приятно сказываются на параметрах спермы и значительно облегчают процедуру.

Кобелю дают возможность совершить садку, при выдвижении пениса из препуция оператор отводит последний назад и сдавливают пенис пальцами каудально от головки (Рис.4).
 
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]
 
Рис. 4 Сбор спермы с использованием течной суки в качестве раздражителя. Оператор отводит препуций, захватывает лукавицы в ладонь, а пальцами сжимает основание полового члена позади луковиц. Сперму соби­рают непосредственно в пластиковую пробирку.

Сбор спермы невозможен до достижения полной эрекции и прекращения толчкообраз­ных движений самца. Для сбора спермы чаще используют одноразовую воронкообразную пла­стиковую чашу. При проведении манипуляции необходимо исключить вероятность травмирования пениса о край сосуда. Такая травма может приводить к разрыву мелких сосудов головки пениса и попаданию крови в эякулят. Особен­но склонны к кровотечениям старые собаки. Неизвестно, как присутствие крови сказывает­ся на параметрах спермы, однако ее наличие затрудняет анализ. В идеале образец должен состоять, из второй фракции (содержащей сперматозоиды ), особенно если сперму предполагается замирозить. При немедленном использовании для искусственного осеменения в пробирку со спермой добавляют 1-2 мл секрета предстательной железы и применяют без дополнительных растворителей.
Анализ спермы
При проведении анализа определяют цвет се­менной жидкости. Нормальным считают оттенки от молочного до слабо-кремового и зависи­мости от плотности; желтый оттенок недопустим и указывает на попадание мочи или на воспалительный процесс; красный свмдетельствует о присутствии крови. Причину отклоне­ния цвета эякулята от нормы выявляют в ходе микроскопического исследования. Эякулят, со­держащий лейкоциты, эритроциты или мочу, центрифугируют при 300-1000 об/мин в тече­ние 5 минут в разбавителе ТRIS (табл.1) или растворе с добавлением антибиотиков, супернатант удаляют, а осадок снова разводят в свежем разбавителе, содержащем антибиотики, и ис­пользуют для искусственного осеменения.

Тригидроксиметиламинометан6,056 г
Лимонная кислота3,400 г
Фруктоза2,500 г
Дистиллированная вода двойной очистки200 мл
Кристаллический пеницилин200 000 ЕД
Дигидрострептомицин0,2 г
Яичный желток вводят непосредственно перед добавлением воды(20% объема) 2мл желтка на 8 мл TRIS базы+антибиотики

Табл.1. Состав раствора ТRIS без глицерина, пред­назначенный для транспортировки охлажденной спер­мы. Буферная база содержит антибиотики.

 

Оценку плотности спермы, т.е. концентра­ции сперматозоидов на единицу объема прово­дят с использованием счетной камеры и микро­скопа или фотометрического счетчика для спер­мы (Рис.5). Количество сперматозоидов и эякуляте вычисляют исходя из их числа в еди­нице объема и полного объема. Общее количе­ство сперматозоидов в сперме собак варьирует от 200 до 1200х 106, содержание во второй фрак­ции 100-700 х 106 /мл.

Для транспортировки свежесобранной спермы в последнее время с успехом применят да вида разбавителей (табл.1 и 2).

В эксперименте было проведено сравнение разбавителей, содержащих яичный желток, яич­ный желток в сочетании со сметаной и яичный Прогрессивную подвижность оценивают визуально под микроскопом со 100-кратным уве­личением. Показатель прогрессивной подвижно­сти (количество сперматозоидов с выраженным поступательным движением) минимально может составлять до 5% при норме 75-90% в неразбав­ленном свежесобранном эякуляте.

В замороженной сперме, если ее предполагается использо­вать для искусственного осеменения, подвиж­ность сперматозоидов после размораживания должна составлять не менее 50%. Активность сперматозоидов (скорость поступательного дви­жения) также является важным показателем, которому субъективно присваивается значение от 0 до 5, где 0 означает отсутствие прогрессив­ного движения (некроспермия), а 5 является наивысшим показателем. Нормальная фертиль-ная сперма обычно имеет показатель 3-5; спер­ма, предназначенная для замораживания, перед заморозкой должна иметь высокие показатели, предпочтительно 5. Низкая температура снижа­ет подвижность сперматозоидов, поэтому для анализа рекомендуется подогревать предметное стекло, в особенности при работе с разморожен­ной спермой.

 

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]

Рис.5. Фотометрический калибратор SpermacueTM для измеренияплотности (количества сперматозоидов в мл) свежеполученной неразведенной спермы собак и лисиц.

 

 

Физиологические растворы, осо­бенно содержащие глицерин, также временно снижают активность сперматозоидов, однако на подогретом предметном стекле она обычно восстанавливается через 2-3 минуты.

В последнее время достаточно широко при­меняют тест на целостность мембраны и жизне­способность спермы (гипоосмотический тест). Тест включает инкубацию спермы в гипоосмотической среде, вызывающей набухание хвоста сперматозоида. Этот тест имеет хорошую корре­ляцию с подвижностью и жизнеспособностью спермы, но не с ее концентрацией.

Морфологический анализ служит для определения процента сперматозоидов с нор­мальным внешним видом либо с помощью фазово-контрастной микроскопии при 200-крат­ном увеличении, либо с использованием менее мощного микроскопа, но тогда с окрашивани­ем нигрозин- эозином. Морфологи­ческие показатели считают нормальными, если процентное соотношение морфологически не­измененных сперматозоидов колеблется в пределах пределах от 65 до 90%. Минимальный процент мор­фологически нормальных сперматозоидов, при котором сохраняется нормальная фертильность, для собак не установлен, однако показатель ниже 60% обычно указывает на нарушения фун­кции тестикул или эпидидимиса. У кобелей в период полового созревания до 40% сперматозоидов могут иметь проксимальные цитоплазматические включения. Сперма, предназначенная для замораживания, должна содержать не менее 75% морфологически нормальных сперматозо­идов.

Показатель целостности акросом особенно важен для морфологической оценки спермы после размораживания. Для подсчета спермато­зоидов с неповрежденной акросомой в лабора­тории автора применяют окрашивание раствором Spermaс™.

 
Сохранение спермы
Для искусственного осеменения свежесобранной спермой ее разбавлять необязательно. Однако если предполагается транспортировка спермы и использование через 2—3 часа, ее разбавляют спе­циальными разбавителями и транспортируют при температуре 4 °С, поскольку такие условия способствуют поддержанию жизнеспособноcти сперматозоидов. желток в сочетании с молоком. Для хранения спермы при 4 °С лучше всего подходит разбави­тель ТRIS. Во всех растворах желток предохраня­ет мембрану сперматозоидов от шока, вызываемого воздействием низкой температуры. Разведение спермы обычно проводят в соотношении 1:6 в зависимости от первоначальной концентрации Важно, чтобы объем раствора превышал объем спермы, и если при сборе сперму не разделили на фракции, ее центрифугируют и, удалив излишки секрета предстательной железысмешивают с ра­створом.

Пастеризованные сливки 12%жирности
8 мл
Яичный желток 20% от объема
2мл

Табл. 1. Желточно-сливочный разбавитель для свежеполученной охлажденной спермы.

 

Охлаждение при транспортировке обеспечи­вают, помещая образец в термос, частично заполненный колотым льдом. Для перевозки образца используют пластиковые пробирки для центрифугирования (например, 
пробирку на 10 мл с завинчивающейся крышкой для клеточной культуры).


Пробирку с образцом помешают в изолирован­ную колбу, колбу кладут в термос поверх слоя льда и оборачивают бумагой. Перед осеменением сперму постепенно согревают до 30-35 С.

ОБРАБОТКА И ЗАМОРАЖИВАНИЕ СПЕРМЫ СОБАКПодготовка и разбавление
Для замораживания к основному раствору TRIS добавляю глицерин и антибиотики (табл. 1). Объем добавляемого глицерина составляет от 12 до 16 мл (6 и 8% общи о объема соответствен­но) в зависимости от техники замораживания: для автоматического замораживания добавляют 6% глицерина, для ручного — 8%. В раствор добавляют дистиллированную воду (188 или 184 мл вместо стандартных 200 мл).

В базовый раствор ТRIS с глицерином до­бавляют 20% яичного желтка. Яичный желток получают от кур, проверенных па отсутствие патогенных факторов (предназначенных на экспорт или домашних). Желток отделяют от бел­ка, выкладывают на лист чистой бумаги, осторожно прокалывают и сливают в воронку и энергично взбивают стеклянной лопаткой, мак­симально измельчая его частицы, — это позволяет снизить связывание головок сперматозои­дов частицами спермы. Наконец, желток смешивают с буферным раствором TRIS до 30 С. Смесь хорошо взбалтывают и нагревают до 35 С. Предварительно приготовленный разбавитель можно замораживать и сохранять в таком виде в течение 2 месяцев. Перед применением его размораживают на водяной бане при температуре 35 С.

Проводят микроскопическое исследование спермы на соответствие перечисленным выше критериям, затем ко второй фракции эякулята добавляют по каплям подогретый до 35 С разбавитель, пока необходимая концентрация не будет достигнута. В лаборатории для замораживания обычно используют образцы с общей концентрацией сперматозоидов до 100×10 6/мл. Однако можно уменьшить наполовину.

Охлаждение.

После разбавления несколько капель образца исследуют сперму под микроскопом, а разбавленную сперму сливают в пластиковые центрифужные пробирки, которые помещают в сосуд с водой, подогретой до 35С. Затем сосуд переносят в холодильник и оставляют на 2 часа при температуре 4С. За это время сперма охлаждается до 4-5 С, а глицерин, выполняющий роль защитного фактора, проникает в мембрану сперматозоидов.

 
Упаковка
Сперму вынимают из холодильника, осторож­но взбалтывают и немедленно помещают в пла­стиковые соломины (пайетты) емкостью 0,5 мл. Для выполнения процедуры применяют специ­альный отсос или насасывают ртом через латексную трубку. При распределении спермы следует проследить за тем чтобы порошок, находящийся между концами фильтров соломины, пропитался жидкостью и затвердел. Сначала соломины запол­няют наполовину, после чего, оставляя пузырек воздуха, доливают, не доводя 1 см до верха. Пузы­рек воздуха препятствует переливанию спермы (за счет изменения давления при разморажива­нии). После этого соломину запечатывают.
Техника замораживания
Существуют два альтернативных метода замороз­ки — ручная и автоматическая. Доля глице­рина в составе разбавителя зависит от применя­емого метода. При ручной заморозке используют контейнер (30 х 40 х 30 см) из полистирола со съемной металлической полкой, помешенной на 10 см ниже края. Контейнер заполняют жид­ким азотом до уровня, находящегося на 4 см ниже полки.
Заполненные соломки (8-10 максимально) захватывают пинцетом, помещают горизонталь­но на полку и оставляют в испаряющемся азоте на 8 минут. Затем пинцет охлаждают в жидком азоте, приподнимают и поворачивают с его по­мощью пайетты, одну за другой, чтобы удостовериться в полной кристаллизации их содержимого . После этого пайетты погружают в жидкий азот. Такую процедуру называют статической в связи с присутствием постоянного нерегулиру­емого потока испаряющегося азота в период охлаждения и заморозки.Автоматическая заморозка подразумевает ис­пользование машины. Такой способ называют динамическим, поскольку испаряющийся азот поступает в морозильную камеру с различной скоростью в зависимости от заданной програм­мы, позволяющей регулировать темпы замороз­ки. Пайетты замораживают в гори­зонтальном положении на полке со съемной крышкой, причем в морозильной камере может находиться несколько таких полок. Программа заморозки включает следующие режимы:
• -2 0С/мин, начиная с +4 0С до -7 0С• -50 0С /мин, от -7 0С до -100 °С• -25 0С /мин, от-100 0С до-180 0С.после окончания процедуры полку помещают непосредственно в жидкий азот.РазмораживаниеПайетты размораживают на водяной бане (в тер­мосе) при температуре 70 "С в течение 8 секунд. После размораживания их ставят вертикально фильтром вниз, распечатывают крышку, встряхи­вают, чтобы пузырек воздуха мог подняться вверх. Соломку вскрывают и несколько капель образца помещают на подогретое предметное стекло для оценки параметров спермы после разморажива­ния. До восстановления подвижности спермато­зоидов проходит некоторое время, обычно 2 ми­нут бывает достаточно. В связи с тем, что разные лаборатории используют различные техники за­мораживания, при размораживании образца спер­мы, полученного из какой-то определенной ла­боратории, необходимо строго соблюдать все по­лученные оттуда рекомендации, поскольку процессы замораживания и размораживания тес­но связаны между собой.ИСКУССТВЕННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕИскусственное осеменение свежей спермой. Практикуется в случаях, если естественная вяз­ка невозможна по ряду причин: кобель и сука живут довольно далеко друг от друга; заводчик намерен осеменить несколько сук или опасает­ся прямого контакта суки с производителем в связи с распространенностью инфекционных заболеваний.Искусственное осеменение замороженной спермыПри наличии свежей спермы процедуру осеме­нения проводят в день овуляции, а потом через2 дня повторяют. При использовании заморо­женной спермы, которая характеризуется сни­женной жизнеспособностью, поскольку процес­сы замораживания и размораживания оказыва­ют негативное воздействие на акросомы и мембраны сперматозоидов, — осеменение осу­ществляют через 1 -2 дня после овуляции, и вто­рую процедуру проводят через 24 часа после пер­вой. Пробы прогестерона в сыворотке крови служат хорошим индикатором овуляции. Кон­центрация прогестерона, определяемая радио­иммунным методом, должна поддерживаться на
уровне 30 нмоль/л (10 нг/мл) в первый день и между 55 и 75 нмоль/л (18-25 нг/мл) на второй день осеменения. Быстрый иммуноферментный метод определения также подходит для оценки качественного и колличественного содер­жания прогестерона.
Техника осеменияСвежую сперму вводят во влагалище с помощью жесткого пластикового катетера, применяемого для осеменения коров, но укороченного до нужного размера. Катетер снабжен шприцем на 2-5 мл с резиновым поршнем. (рис. 6). Необходимо иметь в виду , что не всякий шприц можно использовать, поскольку некоторые типу резин оказывают токсическое воздействие на сперматозоиды.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]

Рис. 6 Три различных вида катетеров с нейлоновой направляющей трубкой, используемых для трансцервикального внутриматочнаго искусственною осеменения собак. Внизу — обычный пластиковый катетер для коров, , укороченный до необходимой длины для интра- вагинального осеменения у собак.

 

 

 

 




 

Вводимый объем не должен

_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
Если ты такой умный, то почему тогда такой бедный???? / "Правда всегда одна." (с) Царь Соломон.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку]

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] - Мои собаки, а так же Доги в Латвии.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] -  Подготовка и хендлинг (показ) ВАШЕЙ СОБАКИ в странах Европы и не только.
avatar
Njusja
Дожик

Сообщения : 1553
Дата регистрации : 2012-02-12
Возраст : 80
Откуда : Riga, Latvija

http://www.olvig.weebly.com

Вернуться к началу Перейти вниз

Re: Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3

Сообщение автор Njusja в Чт Июл 03, 2014 6:45 pm

превышать 3 мл для крупных пород и 2 мл для мелких, в противном случае сперма может вытекать из половых путей самки. Вульву приподнимают указательным стиковый катетер. После введения каудальной конец каетера приподнимают и ведут вдоль дорсальной стенки влагалища к своду влагалища для того, чтобы избежать попадания катетера в мочевой пузырь, поскольку отверстие уретры располагается на вентральной стенке влагалища. Второй рукой оператор пальпирует шейку матки через брюшную стенку, корректируя продвижение катетера. Сперму вводят медленно, после чего выдерживают самку в течение 10 минут нут в положении с приподнятым крупом. Погла­живание области вульвы вызывает сокращения матки, способствующие продвижению спермы.

Для осеменения свежей и замороженно-оттаяной спермой разработан специальный внутри маточный катетер (Рис.6), состоящий из нейлоновой направляющей и ме­таллического катетера с прикрепленным шпицем. Техника заключается во введении во влагалище направляющей трубки, с металлическим катетером внутри; после того, как трубка коснет­ся свода влагалища, металлический катетер выд­вигают вперед и вводят в шейку матки, придер­живая ее большим и указательным пальцем через стенку брюшной полости (Рис.7).
 
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]
 
Рис.7. Искусственное осеменение собаки с помощью внутриматочного катетера. Поверх катетера надета мастиковая трубка, предотвращающая контамина­цию влагалищной микрофлорой или травму слизистой влагалища металлическим катетерам.
 
 
Канал шей­ки прямой с незначительными складками и по­чти полностью раскрыт на стадии эструса, поэто­му введение катетера обычно не вызывает затруд­нений. Для выполнения процедуры животное поднимают на стол, седация обычно не требуетса (Рис. 8).
 
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть это изображение]
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Рис.8Транцервикалыюе искусственное осемене­ние. Животное находится на столе. Седация обычно не требуется, процедура занимает менее 5 мин.
 
Выполнение манипуляции предпо­лагает наличие определенных навыков, занимает у опытного оператора не более 1—2 минут и не причиняет животному дискомфорта. После вы­полнения внутриматочного осеменения припод­нимать тазовую область суки необязательно.
Рекомендуемая доза при внутриматочном осе­менении замороженно-оттаявшей спермой со­ставляет 100×106 сперматозоидов на одно осеме­нение, однако оплодотворение обеспечивается и меньшим количеством сперматозоидов— 35-40 х 106 на одно осеменение при условии коррект­ного выбора даты проведения процедуры и со­блюдения технологии размораживания спермы. Доза 100 х 10мл основана на результатах экспе­риментов автора со спермой лисиц, в ходе кото­рых важным параметром являлась численность помета. При осеменении в ходе лапаротомии можно ограничиться еще меньшим количеством спермы, однако, насколько известно автору, по­добные эксперименты не проводились.
Несмотря на возможность интравагинального осеменения при использовании замороженно-оттаявшей спермы наилучшие результаты обес­печивает внутри маточное осеменение, позволя­ющее к тому же снизить дозу спермы.
Если катетеризация невозможна или опера­тор незнаком с техникой ее проведения, реко­мендуется искусственное осеменение в ходе лапароскопии или с применением эндоскопа. В США и Канаде хирургические методы ис­кусственного осеменения являются наиболее распространенными. Однако в большинстве европейских стран интравагинальное осеме­нение, а также техники с применением кате­тера и эндоскопа считают более этичными.

_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
Если ты такой умный, то почему тогда такой бедный???? / "Правда всегда одна." (с) Царь Соломон.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку]

[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] - Мои собаки, а так же Доги в Латвии.
[Вы должны быть зарегистрированы и подключены, чтобы видеть эту ссылку] -  Подготовка и хендлинг (показ) ВАШЕЙ СОБАКИ в странах Европы и не только.
avatar
Njusja
Дожик

Сообщения : 1553
Дата регистрации : 2012-02-12
Возраст : 80
Откуда : Riga, Latvija

http://www.olvig.weebly.com

Вернуться к началу Перейти вниз

Re: Библиотека: "Искусственное осеменение собак" -3

Сообщение автор Спонсируемый контент


Спонсируемый контент


Вернуться к началу Перейти вниз

Вернуться к началу


 
Права доступа к этому форуму:
Вы не можете отвечать на сообщения